公司產(chǎn)品

shRNA慢病毒載體

慢病毒表達載體包含了包裝、轉染、穩定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質(zhì)??商峁┧械霓D錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒,需要利用表達載體和包裝質(zhì)粒同時(shí)共轉染細胞,

產(chǎn)品描述

慢病毒表達載體包含了包裝、轉染、穩定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質(zhì)??商峁┧械霓D錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒,需要利用表達載體和包裝質(zhì)粒同時(shí)共轉染細胞,在細胞中進(jìn)行病毒的包裝,包裝好的假病毒顆粒分泌到細胞外的培養基中,離心取得上清液后,可以直接用于宿主細胞的感染,目的基因進(jìn)入到宿主細胞之后,經(jīng)過(guò)反轉錄,整合到基因組,從而高水平的表達效應分子。


載體的技術(shù)特點(diǎn)

1、大大提高對于一些較難轉染的細胞, 如原代細胞、干細胞、不分化的細胞等轉導效率
2、快速獲得高水平的表達
3、目的基因整合到宿主細胞基因組的幾率大大增加
4、將免疫反應降到最低
5、能夠插入大的片段(~7.5 kb)
6、能夠應用于干細胞研究
7、最低的細胞毒性


慢病毒表達系統

本公司使用的慢病毒表達系統,它由三部分組成:慢病毒表達載體、慢病毒包裝質(zhì)粒、可產(chǎn)生假病毒顆粒的細胞系。


慢病毒表達載體包含了包裝、轉染、穩定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質(zhì)??商峁┧械霓D錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒,需要利用表達載體和包裝質(zhì)粒同時(shí)共轉染細胞,在細胞中進(jìn)行病毒的包裝,包裝好的假病毒顆粒分泌到細胞外的培養基中,離心取得上清液后,可以直接用于宿主細胞的感染,目的基因進(jìn)入到宿主細胞之后,經(jīng)過(guò)反轉錄,整合到基因組,從而高水平的表達效應分子。


慢病毒介導的 siRNA活體實(shí)驗用病毒液服務(wù)流程

對于活體 RNAi實(shí)驗模型,吉瑪公司可以為您生產(chǎn)高質(zhì)量的病毒液,服務(wù)流程如下:

根據目的基因相關(guān)信息(序列,序列號等),利用高效的設計軟件,設計 siRNA序列,針對每條目的基因,我們設計4條siRNA序列,其中1條序列為陰性對照組;

根據設計好的 siRNA序列,設計,合成兩條互補的短片段的DNA;

對合成好的 DNA片段進(jìn)行稀釋?zhuān)嘶?,連接到線(xiàn)形化處理過(guò)的載體,轉化,涂平板,過(guò)夜培養;

通過(guò) PCR的方法篩選陽(yáng)性菌落,進(jìn)行測序,分析測序結果;

對于測序正確的重組質(zhì)粒,提取和純化高質(zhì)量的不含內毒素的 siRNA病毒穿梭質(zhì)粒;

利用構建好的質(zhì)粒做轉染實(shí)驗, 48小時(shí)后通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量和Western的方法分析目的基因,篩選出一條最有效的siRNA序列;

篩選出的高效重組載體和病毒包裝質(zhì)粒共轉染 293T細胞,進(jìn)行病毒包裝和生產(chǎn),收集病毒液;

濃縮、純化病毒液,測定滴度;

提供高質(zhì)量的病毒液給客戶(hù)(對于活體實(shí)驗,我們建議的病毒基本單位為 1×10^9TU/ml ,對于小鼠尾靜脈給藥建議50~100ul/只)


Lentiviral shRNA的基因沉默效率



Lentiviral shRNA 抑制生長(cháng)導管形成



Lentiviral shRNA 引起的表型變化



即用型Lentivirus shRNA構建包裝服務(wù)

Lentivirus shRNA服務(wù)特點(diǎn):

1、適用于原代培養細胞,難以轉染的各種細胞

2、可用于制備多種穩定沉默特定基因的細胞株

3、您通過(guò)GenePharma SupersilencingTM Vector方法篩選到有效的的基因沉默靶點(diǎn),如果您需要構建慢病毒載體來(lái)滿(mǎn)足實(shí)驗需求



Lentivirus shRNA載體

GenePharma Supersilencing Vector 干擾載體 
包裝載體:Helper vector-I
Helper vector-II
Helper vector-III
提高包裝效率和對特定細胞的感染力,提高生物安全性



品質(zhì)保證

客戶(hù)自己提供的序列委托我們制備的病毒顆粒,我們確保制備的病毒顆粒攜帶片段的正確性,確保病毒顆粒的總數和病毒顆粒的滴度達到合同規定的要求。

siRNA高效表達慢病毒載體構建

1. 通過(guò)專(zhuān)業(yè)設計人員的精心篩選獲得欲篩選的siRNA序列。

2. 設計siRNA 正義、反義鏈,選擇相應loop結構,加上酶切位點(diǎn)的目的序列。

3. 合成相應的DNA序列,然后克隆于相應的慢病毒表達載體。

4. 將載體轉化到宿主菌中進(jìn)行克隆、篩選,得到質(zhì)粒重組體即siRNA表達載體。

5. siRNA表達載體在真核細胞中可產(chǎn)生siRNA,從而在細胞內產(chǎn)生特定基因的沉默效果。此方法是多種siRNA制備方法中唯一可以進(jìn)行長(cháng)期基因沉默研究的方法。

本公司為您提供siRNA高效表達慢病毒載體構建服務(wù)。構建好的siRNA表達載體,可直接用于轉染細胞進(jìn)行RNA干擾操作。


服務(wù)要求 

1. 通過(guò)E-mail發(fā)送訂單,告知選定的相應的基因信息,待構建的靶點(diǎn)信息。靶基因在NCBI數據庫中的Gene ID、Accession No.

2. 我們可為您免費設計siRNA序列.

訂購流程

1. 請用E-mail或者電話(huà)聯(lián)系吉瑪公司。E-mail:order@genepharma.com;Tel:021-51320195。

2. 根據客戶(hù)提供的基因信息設計siRNA序列,并由客戶(hù)確認。 

3. 根據客戶(hù)提供的siRNA序列信息或經(jīng)客戶(hù)確認的siRNA序列信息設計引物。 

4. 根據所選擇的慢病毒載體構建相應的siRNA表達載體。 

5. 在完成相應的試驗后,我們將為您提供一套完整的實(shí)驗結果,其中包括:實(shí)驗操作說(shuō)明、電子版的測序結果及彩圖、構建好的siRNA慢病毒表達載體質(zhì)粒及其甘油菌等。 

目錄號 產(chǎn)品名稱(chēng) 規格 價(jià)格 交貨期限
C06001 慢病毒干擾載體LV-1 (pGLVU6/GFP) 50μg ¥1,000 15個(gè)工作日
C06002 慢病毒干擾載體LV-2N (pGLVU6/Puro) 50μg ¥1,000 15個(gè)工作日
C06003 慢病毒干擾載體LV-3 (pGLVH1/GFP+Puro) 50μg ¥1,000 15個(gè)工作日
C06004 慢病毒干擾載體LV-9N (pGLVU6/mCherry) 50μg ¥1,000 15個(gè)工作日
C06005 慢病毒干擾載體LV-10N (pGLVU6/mCherry/Puro) 50μg ¥1,000 15個(gè)工作日
C06006 慢病毒干擾載體LV-12 (pGLVH6/luci05/Puro) 50μg ¥1,000 15個(gè)工作日
C06007 慢病毒干擾載體LV-15N (pGLVH1/mCherry/Puro) 50μg ¥1,000 15個(gè)工作日
C06008 慢病毒干擾載體LV-16 (pGLVU6/Firefly/Puro) 50μg ¥1,000 15個(gè)工作日
C06027 慢病毒干擾載體 LV-U6-Neo  50μg ¥1,000 15個(gè)工作日
C06028 慢病毒干擾載體 LV-U6-copGFP-T2A-Neo  50μg ¥1,000 15個(gè)工作日
C06029 慢病毒干擾載體 LV-U6-mCherry-T2A-Neo  50μg ¥1,000 15個(gè)工作日
C06030 慢病毒干擾載體 LV-U6-Luci17-T2A-Neo    50μg ¥1,000 15個(gè)工作日



吉瑪基因shRNA慢病毒載體圖譜


                   

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功能介紹與實(shí)驗實(shí)例

慢病毒載體是一類(lèi)重組逆轉錄病毒載體,由於其結構和功能的特點(diǎn)作為一種重要的基因轉移工具被應用於 基因治療和細胞分子生物學(xué)研究領(lǐng)域,區別一般的逆轉錄病毒載體,它對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能 力。該載體可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上,從而達到持久性表達。在感染能力方面可有效地感染 神經(jīng)元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、內皮細胞、干細胞等多種類(lèi)型的細胞,從而達到良好的的基因治 療效果。慢病毒載體的研究發(fā)展得很快,研究的也非常深入。在美國已經(jīng)開(kāi)展了臨床研究,效果非常理想,因 此具有廣闊的應用前景。

 1、 大大提高對於一些較難轉染的細胞, 如原代細 胞、干細胞、不分裂的細胞等轉導效率 


2、 目的基因整合到宿主細胞基因組的幾率大大增加 


3、能夠插入大的片段(~ 7.5 kb) 


4、最低的細胞毒性 


慢病毒滴度檢測照片

200×熒光顯微鏡下觀(guān)察熒光進(jìn)行滴度檢測96孔細胞板 10ul陰性對照病毒原液稀釋10-5后,
1ml病毒原液滴度100(一個(gè)視野100個(gè)熒光細胞)×4(平均4個(gè)視野)×105(稀釋倍數)×100=4×10^9 TU/ml








使用方法

慢病毒介導的 siRNA活體實(shí)驗用病毒液服務(wù)流程

對於活體 RNAi實(shí)驗模型,吉瑪可以為您生產(chǎn)高質(zhì)量的病毒液,服務(wù)流程如下:

1、根據目的基因相關(guān)信息(序列,序列號等),利用高效的設計軟件,設計 shRNA序列,針對每條目的
基因,我們設計4條shRNA序列;

2、根據設計好的 shRNA序列,設計,合成兩條互補的短片段的DNA;

3、對合成好的 DNA片段進(jìn)行稀釋?zhuān)嘶?,連接到線(xiàn)形化處理過(guò)的載體,轉化,涂平板,過(guò)夜培養;

4、通過(guò) PCR的方法篩選陽(yáng)性菌落,進(jìn)行測序,分析測序結果;

5、對於測序正確的重組質(zhì)粒,提取和純化高質(zhì)量的不含內毒素的 shRNA病毒穿梭質(zhì)粒;

6、篩選出的高效重組載體和病毒包裝質(zhì)粒共轉染 293T細胞,進(jìn)行病毒包裝和生產(chǎn),收集病毒液;

7、濃縮、純化病毒液,測定滴度;

8、提供高質(zhì)量的病毒液給客戶(hù)(對於活體實(shí)驗,我們提供的病毒基本單位為 1×10^8TU/ml ,這個(gè)單位為一只小鼠一次實(shí)驗的平均用量)

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

相關(guān)文獻

1.Qu H, Lin K, Wang H, Wei H, Ji B, Yang Z, Peng C, Xiao X, Deng H. 1, 25 (OH) 2D3 improves cardiac dysfunction, hypertrophy, and fibrosis through PARP1/SIRT1/mTOR‐related mechanisms in type 1 diabetes. Molecular nutrition & food research. 2017 May; 61(5).

2.Sun W, Cai H, Zhang G, Zhang H, Bao H, Wang L, Ye J, Qian G, Ge C. Dmrt1 is required for primary male sexual differentiation in Chinese soft-shelled turtle Pelodiscus sinensis. Scientific Reports. 2017 Jun; 7: 4433. 

3.Tan X, Lv J, Zhao G, Zhao Z, Li C, Xu Y, Hu M. MicroRNA‐4656 is a prognostic factor and tumor suppressor in human pancreatic cancer through a downstream target of TrkA. The journal of gene medicine. 2017 Jan; 19.

4.Wang H, Shen Q, Zhang X, Yang C, Cui S, Sun Y, Wang L, Fan X, Xu S. The long non-coding RNA XIST controls non-small cell lung cancer proliferation and invasion by modulating miR-186-5p. Cellular Physiology and Biochemistry. 2017 Apr; 41(6): 2221-9. an>4656 is a prognostic factor and tumor suppressor in human pancreatic cancer through a downstream target of TrkA. The journal of gene medicine. 2017 Jan; 19.

5.Yan X, Zhu Z, Xu S, Yang LN, Liao XH, Zheng M, Yang D, Wang J, Chen D, Wang L, Liu X, Liu J, Chen RH, Zhou XZ, Lu KP, Liu H. MicroRNA-140-5p inhibits hepatocellular carcinoma by directly targeting the unique isomerase Pin1 to block multiple cancer-driving pathways. Scientific Reports. 2017; 7: 45915. stic factor and tumor suppressor in human pancreatic cancer through a downstream target of TrkA. The journal of gene medicine. 2017 Jan; 19.

6.Yu F, Guo Y, Chen B, Shi L, Dong P, Zhou M, Zheng J. LincRNA-p21 Inhibits the Wnt/β-Catenin Pathway in Activated Hepatic Stellate Cells via Sponging MicroRNA-17-5p. Cellular Physiology and Biochemistry. 2017 Jun; 41(5): 1970-80. mso-bidi-language:AR-SA'> stic factor and tumor suppressor in human pancreatic cancer through a downstream target of TrkA. The journal of gene medicine. 2017 Jan; 19.

7.Xu Z, Han K, Chen J, Wang C, Dong Y, Yu M, Bai R, Huang C, Hou L. VEGF is neuroprotective against ischemic brain injury by inhibiting scavenger receptor A expression on microglia. Journal of Neurochemistry. 2017 Jun. 0-80. mso-bidi-language:AR-SA'> stic factor and tumor suppressor in human pancreatic cancer through a downstream target of TrkA. The journal of gene medicine. 2017 Jan; 19.

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9.Cai H, Yao J, An Y, Chen X, Chen W, Wu D, Luo B, Yang Y, Jiang Y, Sun D, He X. LncRNA HOTAIR acts as competing endogenous RNA to control the expression of Notch3 via sponging miR-613 in pancreatic cancer. Oncotarget. 2017 May 16; 8(20): 32905-17. 

10.Chen MB, Ji XZ, Liu YY, Zeng P, Xu XY, Ma R, Guo ZD, Lu JW, Feng JF. Ulk1 over-expression in human gastric cancer is correlated with patients' T classification and cancer relapse. Oncotarget. 2017 May 16; 8(20): 33704-12.

11.Li J, Wang P, Xie Z, Yang R, Li Y, Wu X, Su H, Deng W, Wang S, Liu Z, Cen S, Ouyang Y, Wu Y, Shen H. Elevated TRAF4 expression impaired LPS-induced autophagy in mesenchymal stem cells from ankylosing spondylitis patients. Experimental & Molecular Medicine. 2017 Jun; 49(6): e343.

12.Liu N, Zhang L, Wang Z, Cheng Y, Zhang P, Wang X, Wen W, Yang H, Liu H, Jin W, Zhang Y, Tu Y. MicroRNA-101 inhibits proliferation, migration and invasion of human glioblastoma by targeting SOX9. Oncotarget. 2017 Mar 21; 8(12): 19244-54.

13.Liu W, Mao L, Ji F, Chen F, Hao Y, Liu G. Targeted activation of AMPK by GSK621 ameliorates H2O2-induced damages in osteoblasts. Oncotarget. 2017 Feb 2; 8(6): 10543-52.

14.Zhang C, Zhang W, Lu Y, et al. NudC regulates actin dynamics and ciliogenesis by stabilizing cofilin 1. Cell research. 2016 Feb; 26: 239-53.



訂購須知

目錄分類(lèi) 本商品目錄中的產(chǎn)品介紹按以下內容分類(lèi):

1. RNA干擾研究工具
2. MicroRNA研究工具 

產(chǎn)品價(jià)格 本產(chǎn)品目錄中標示的價(jià)格均為國內統一零售參考價(jià),全部為人民幣價(jià)格。如果大量定購時(shí),在標準價(jià)格的基礎上有不同程度的優(yōu)惠。 

質(zhì)量保證 凡吉瑪公司的產(chǎn)品均有嚴格的質(zhì)量保證。如果我們發(fā)現確實(shí)存在質(zhì)量問(wèn)題時(shí),保證更換產(chǎn)品。如果在到貨后一個(gè)月之內用戶(hù)無(wú)提出異議,我們將視本產(chǎn)品為優(yōu)良產(chǎn)品而不再受理投訴事宜。提出產(chǎn)品異議(或投訴)時(shí),切莫在產(chǎn)品使用完(或快使用完)后提出,以備本公司回收產(chǎn)品,確認產(chǎn)品質(zhì)量。由于訂錯產(chǎn)品而產(chǎn)生的退貨情況,原則上由客戶(hù)承擔相關(guān)費用。發(fā)生投訴事宜時(shí),公司只保證在產(chǎn)品價(jià)格額度范圍之內酌情賠償,恕不受理超過(guò)制品價(jià)格額度以上之部分。退款時(shí)需退還原始發(fā)票。




下單前請務(wù)必核對訂購表客戶(hù)信息和訂購內容無(wú)誤,訂單一經(jīng)確認,當天即啟動(dòng)生產(chǎn)。 超過(guò)當日17:00后不能修改或者取消,如果需要取消訂單,由此產(chǎn)生的費用,將由客戶(hù)承擔。

【取消訂單費用規則】

(1)當日17:00前,免費修改或取消。

(2)當日17:00到次日17:00前,按該項產(chǎn)品金額的50%收取。

(3)次日17:00后,按該項產(chǎn)品金額的100%收取。


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